- 蛋白电泳技术
  - 应用领域
    - 蛋白质纯度检测
    - 未知蛋白相对分子质量测定
  - 电泳基础回顾
    - 带电颗粒在电场中移动现象
    - 利用移动速率差异实现分离
    - 瑞典科学家蒂塞留斯获1948年诺贝尔化学奖
  - 影响电泳移动速率的因素
    - 带电颗粒性质
      - 带电颗数
      - 相对分子质量
      - 空间构型
    - 缓冲溶液条件
      - pH值
      - 离子强度
    - 电场强度
    - 支持介质特性
      - 种类
      - 浓度
      - 筛孔大小
  - 聚丙烯酰胺凝胶特点
    - 化学性能稳定
    - 吸附和电渗几乎为零
  - SDS-PAGE电泳技术
    - 中文名称与要点
      - 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
      - SDS
      - 不连续电泳
      - PAGE
    - SDS作用
      - 破坏蛋白空间构象和多肽链结合
      - 消除不同蛋白质电荷差异
      - 形成长椭圆棒状复合物
    - 不连续电泳特点
      - 样品先经浓缩胶形成窄带
      - 进入分离胶进行分离
      - 兼具电荷效应和分子筛效应
    - 聚丙烯酰胺凝胶组成
      - 丙烯酰胺单体
      - 交联剂双丙烯酰胺
      - Tris-HCl缓冲系统
        - 浓缩胶pH值6.8
        - 分离胶pH值8.8
      - SDS作为变性剂
      - TEMED催化聚合反应
  - 凝胶制备步骤
    - 工具准备
      - 凝胶架
      - 泡沫垫
      - 玻璃板
      - 凝胶板夹
      - 梳子
    - 搭装凝胶
      - 安全防护措施
      - 玻璃板底部平整
      - 铺平泡沫垫
    - 试漏操作
      - 加去离子水观察是否漏液
      - 滤纸吸干残余水分
    - 制备分离胶
      - 丙烯酰胺与交联剂比例29:1
      - 使用pH值8.8的Tris-HCl缓冲液
      - SDS低温处理
      - TEMED微量加入
      - 混匀避免气泡
      - 加水封压平胶面
    - 制备浓缩胶
      - 确认分离胶凝固状态
      - 倒掉水分并吸干
      - 灌胶至玻璃板水平线
      - 插入梳子等待凝固
  - 总结与思考
    - SDS-PAGE中文名称与要点
    - 凝胶制备操作流程
    - 微量加样法与混匀方法
    - 思考题：总结溶液混匀方法及其应用场合